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PEI 40K Transfection Reagent

價(jià)格: 在線(xiàn)咨詢(xún)
貨號:
FKU0114
產(chǎn)品規格:
1ml
購買(mǎi)數量:
產(chǎn)品詳情 操作說(shuō)明 注意事項

產(chǎn)品簡(jiǎn)介

PEI 40K Transfection Reagent(線(xiàn)性化聚乙烯亞胺轉染試劑),是一種以線(xiàn)性化聚乙烯亞胺為主體、分子量為40000的高電荷陽(yáng)離子聚合物,其本身帶正電,可以有效的結合帶負電的核酸,與之形成復合物,并導入到細胞中,適用于細胞的質(zhì)粒DNA轉染。PEI 40K(線(xiàn)性化聚乙烯亞胺)轉染試劑細胞毒性低,轉染效率高且成本低,相較于脂質(zhì)體類(lèi)轉染試劑,性?xún)r(jià)比極高。目前已經(jīng)驗證線(xiàn)性PEI 40K轉染試劑廣泛適用于多種細胞系包括HEK-293、HEK293T、CHO-K1、COS-1、COS-7、NIH/3T3、Sf9、HepG2和Hela細胞等,轉染效率高達80%~90%。本產(chǎn)品主要成分PEI 40K濃度為1 mg/mL。



儲存與運輸

冰袋(wet ice)運輸;4℃保存,有效期至少6個(gè)月;長(cháng)期不用可-20℃保存更長(cháng)時(shí)間,避免反復凍融。


組成

Component

G1802-1ML

G1802-10ML

PEI 40 K Transfection Reagent

1 mL

10×1 mL

產(chǎn)品說(shuō)明書(shū)

1份


操作步驟

1. 貼壁細胞轉染前準備工作(6孔板為例,其他規格參考附表):

a) 轉染前一天,將細胞以合適的密度均勻種植于孔板中,以正式轉染時(shí)細胞匯聚至70-85%為宜;

b) 轉染前,去除原細胞培養基,用PBS清洗1-2次后,更換1.8 mL不含血清或者低血清(5%以下)的基礎培養基,或Opti-MEM;不同細胞對于血清依賴(lài)性不同,根據具體細胞種類(lèi)調整。

c) 將換好液的細胞放置于培養箱中,并開(kāi)始配制轉染復合物。

2. 懸浮細胞轉染前準備工作:

a) 轉染當天,將適量的細胞,離心去除培養基后,用不含血清或者低血清(5%以下)的基礎培養基重懸;

b) 將準備好的懸浮細胞放置到培養箱中,并開(kāi)始配制轉染復合物,轉染復合物和培養基之間的體積比,可以參考貼壁細胞的比值,進(jìn)行適當調整。

3. 轉染復合物準備:

a) 配制A液:100 μL不含血清的基礎培養基與2 μg質(zhì)粒DNA,吹吸混勻;

b) 配制B液:100 μL不含血清的基礎培養基與6-8 μL PEI 40 K Transfection Reagent,吹吸混均;

c) 將B液加到A液中,輕輕吹打混均,室溫孵育15 min,使其形成DNA-PEI轉染復合物。

4. 轉染細胞:

a) 將上一步得到的轉染復合物,以畫(huà)十字或者環(huán)繞的方式,滴加到之前換好液的孔板中;

b) 手持孔板在平面上畫(huà)“8”字或其他的方式輕搖培養板,使其混合充分,置于37℃,5% CO2培養箱中孵育;

c) DNA-PEI轉染復合物與細胞共同孵育4-6 h即有較好的轉染效率,適當延長(cháng)或過(guò)夜孵育,轉染效率更佳。


注意事項

1. 請使用狀態(tài)良好的健康細胞,復蘇的細胞建議至少傳代2次后再進(jìn)行轉染。

2. 請使用高質(zhì)量、無(wú)內毒素的質(zhì)粒DNA。

3. 轉染時(shí)高濃度血清以及抗生素的使用,可能會(huì )影響細胞狀態(tài)以及轉染效率。

4. 不同的細胞耐受性、敏感性不一樣,轉染孵育時(shí)間長(cháng)短,以及PEI/DNA使用比例,可視情況酌情調整。

5. 操作時(shí)請穿實(shí)驗服,佩戴一次性手套。


附表:不同細胞培養容器轉染使用量(僅供參考)

培養器皿

生長(cháng)面積

cm2

接種細胞數

DNA量

(μg)

PEI

(μL)

轉染復合物體積

(μL)

總體積

mL)

96孔板

0.3

(2-4)×104

0.1

0.3-0.4

10

0.1

24孔板

1.9

(1.2-2.4)×105

0.5-1

1.5-4

50

0.5

12孔板

3.8

(2.4-4.8)×105

1-2

3-8

100

1

6孔板

9.5

(6-10)×105

2-4

6-16

200

2

10 cm培養皿

55

(4-6)×106

12-24

36-96

1000

12

T75培養瓶

75

(6-10)×106

18-36

54-144

1000

15

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