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Bradford 法蛋白定量檢測試劑盒

價(jià)格: 在線(xiàn)咨詢(xún)
貨號:
S0921K44
產(chǎn)品規格:
250ml
購買(mǎi)數量:
產(chǎn)品詳情 操作說(shuō)明 注意事項

產(chǎn)品簡(jiǎn)介

目前最常用的蛋白濃度定量檢測方法有兩種,即Bradford法和BCA法。Bradford法原理是基于考馬斯亮藍G250能與蛋白質(zhì)快速結合??捡R斯亮藍G250在游離狀態(tài)下呈紅色,最大光吸收在488 nm,其與蛋白質(zhì)結合后在595 nm處有最大吸收值,并且光吸收值與蛋白質(zhì)含量成正比,因此可用于蛋白質(zhì)的定量檢測。本方法測定蛋白濃度不受絕大部分樣品中的化學(xué)物質(zhì)的影響,樣品中β-巰基乙醇的濃度可高達1 mM,二硫蘇糖醇的濃度可高達5 mM;但受略高濃度的去垢劑影響,需確保SDS含量低于0.01%,Triton X-100含量低于0.05%,Tween-20,Tween-60,Tween-80等含量低于0.015%。含去垢劑的樣品推薦使用本公司生產(chǎn)的BCA蛋白濃度測定試劑盒。

本試劑盒操作簡(jiǎn)便快捷,靈敏度高,檢測速度極快,可檢測蛋白濃度范圍為25-1000μg/mL。



儲存與運輸

整套試劑可常溫運輸;蛋白標準品(BSA)4℃保存,有效期12個(gè)月。配制成蛋白標準溶液后需-20℃保存,并在6個(gè)月內使用。


操作步驟

1. 配制蛋白標準貯備液:取1 mL蛋白標準配制液加入到蛋白標準品(BSA)管中,將25 mg蛋白標準品完全溶解,即得到濃度為25 mg/mL的蛋白標準貯備液。配制成的蛋白標準溶液可-20℃長(cháng)期保存。

2. 配制蛋白標準工作液:取適量25 mg/mL蛋白標準貯備液,用PBS或生理鹽水稀釋50倍,得到終濃度為0.5 mg/mL的蛋白標準工作液。注意稀釋時(shí)按照10倍梯度方法稀釋?zhuān)_保稀釋準確。

3. 繪制標準曲線(xiàn)(酶標儀法):將蛋白標準工作液分別按0,1,2,4,8,12,16,20 μL加到96孔板中,然后用PBS或生理鹽水依次加20,19,18,16,12,8,4,0 μL將上述梯度工作液補足到20 μL。得到蛋白濃度依次為0,25,50,100,200,300,400,500 μg/mL的梯度曲線(xiàn)。

4. 準備待測樣品:將待測的蛋白樣品進(jìn)行適當稀釋?zhuān)赏ㄟ^(guò)預實(shí)驗檢測,使樣品蛋白濃度在標準曲線(xiàn)范圍內,確保檢測結果可信),按照每個(gè)樣品20 μL的量加到96孔板中。待測樣品與蛋白標準品用相同溶液稀釋。

5. 檢測:向以上每孔加入200 μL考馬斯亮藍G250溶液充分混勻(可將96孔板放在振蕩器上振蕩30 s),室溫放置3-5 min后,以標準曲線(xiàn)0號做參比,在595 nm波長(cháng)下比色測定,記錄各孔吸光度值。

6. 計算:以標準曲線(xiàn)中梯度蛋白含量(μg/mL)為橫坐標,吸光值為縱坐標,繪出標準曲線(xiàn)。根據所測樣品的吸光值,在標準曲線(xiàn)上即可查得相應孔中待測樣品的蛋白濃度(μg/mL),再乘以樣品稀釋倍數即為待測樣品實(shí)際蛋白濃度。

另:如用分光光度計測定,則在第3步中將梯度標準品反應體積改為1 mL。向7支潔凈的玻璃試管或比色管中分別加入0,0.05,0.1,0.2,0.4,0.6,0.8,1.0 mL蛋白標準工作液(濃度0.5 mg/mL),然后各管中依次分別加入PBS或生理鹽水1.0,0.95,0.9,0.8,0.6,0.4,0.2,0 mL,將梯度工作液補足至1 mL,每管充分混勻,即得到蛋白濃度依次為0,25,50,100,200,300,400,500 μg/mL的梯度曲線(xiàn)。

待測蛋白樣品做適當稀釋后,加入到新的玻璃試管或比色管中,樣品量為1 mL。

向上述標準曲線(xiàn)梯度管及樣品管中各加入考馬斯亮藍G250溶液3 mL,充分混勻,室溫靜置3-5 min后用分光光度計進(jìn)行比色檢測。

檢測時(shí)分光光度計波長(cháng)設置595 nm,以標準曲線(xiàn)0號管為參比調零,檢測標準曲線(xiàn)及待測樣品。按照步驟6中的方法繪制標準曲線(xiàn)及計算待測樣品中的蛋白濃度。


注意事項

1. 考馬斯亮藍G250溶液使用前需恢復至室溫,并顛倒混勻,以免影響檢測的靈敏度。

2. 在進(jìn)行蛋白標準貯備液的配制時(shí),需確保溶解充分。稀釋配制蛋白標準工作液時(shí)建議10倍梯度稀釋?zhuān)灰淮蜗♂?0倍,以免產(chǎn)生較大誤差。

3. 操作時(shí)請穿實(shí)驗服,并佩戴一次性手套。


產(chǎn)品僅供科研用途,不用于臨床診斷!

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