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大小鼠外周血淋巴細胞分離液

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貨號:
FKU0150
產(chǎn)品規格:
100ml
購買(mǎi)數量:
產(chǎn)品詳情 操作說(shuō)明 注意事項

產(chǎn)品描述

本產(chǎn)品是適用于大鼠和小鼠外周血淋巴細胞分離的梯度密度分離液,其原理主要是根據外周血不同細胞之間的密度差異(紅細胞和粒細胞密度大約為1.090 g/mL;血小板密度1.030-1.035 g/mL;淋巴細胞和單核細胞密度1.075-1.090 g/mL),通過(guò)梯度密度離心,將淋巴細胞從外周血中分離出來(lái)。本產(chǎn)品為無(wú)菌、低內毒素水平的即用型分離液,液密度為1.083 ± 0.001 g/mL(20℃)。嚙齒動(dòng)物的淋巴細胞密度稍高于人淋巴細胞,且小鼠外周血分離易溶血。根據這些特性,本產(chǎn)品在傳統Ficoll-泛影葡胺基礎上進(jìn)行了優(yōu)化,能夠在血液加入后較長(cháng)的時(shí)間內維持分離液的穩定性,且使用操作簡(jiǎn)單且分離的淋巴細胞純度高、狀態(tài)好。


儲存與運輸

冰袋(wet ice)運輸;2-8℃避光保存,有效期12個(gè)月。


操作步驟

以分離1 mL鼠類(lèi)外周血淋巴細胞分離為例,血液和淋巴細胞分離液體積比為1:1-1:2,在此范圍內適當調整;選擇離心管時(shí)需注意,血液和淋巴細胞分離液總體積不超過(guò)離心管容積的三分之二。

1. 取新鮮抗凝全血(肝素、EDTA、枸櫞酸鈉等抗凝劑皆可)1 mL,加入等體積PBS或者無(wú)鈣鎂Hanks緩沖液稀釋?zhuān)吹玫? mL稀釋的全血;

2. 吸取大小鼠外周血淋巴細胞分離液3 mL加入到15 mL無(wú)菌離心管中;

3. 將離心管傾斜45°,將2 mL稀釋后的血液沿管壁緩慢加入到離心管中,使血液平鋪在大小鼠外周血淋巴細胞分離液上層;

4. 建議使用水平轉頭離心機離心,將離心管置于水平轉頭適配器中,降低離心機加減速(3-5檔為宜),室溫條件下800 g離心25 min;

5. 離心后,輕拿離心管置于管架上,可觀(guān)察到明顯的分層現象:最上層是血漿層;中上白膜層是淋巴細胞層;中下層為淋巴細胞分離液層;最下層為紅細胞和粒細胞層(參考附圖);

6. 吸除最上層血漿層,小心吸取白膜層(淋巴細胞層)到另外一個(gè)潔凈的無(wú)菌離心管;

7. 用8 mL PBS或其他緩沖液洗滌后,100 g離心10 min,棄上清;

8. 重復步驟7(可選)

9. 根據實(shí)驗目的用所需培養基或緩沖液重懸淋巴細胞。



注意事項

1. 本產(chǎn)品在使用前需室溫充分平衡并顛倒混勻,分離時(shí)溫度以18-25℃為宜。

2. 為保持淋巴細胞的活性,血液最好選取采血2 h以?xún)鹊男迈r抗凝血液;如需對分離的淋巴細胞進(jìn)行進(jìn)一步的培養和檢測,請在采血和分離的過(guò)程中注意無(wú)菌操作。

3. 稀釋或洗滌緩沖液,不可使用含鈣、鎂離子的緩沖液,以免導致血細胞凝聚。

4. 過(guò)多的吸取白膜層以外的成分,會(huì )導致交界處的一些粒細胞或血小板等被混入。

5. 由于不同血液樣本間的差異,可能對分離效果產(chǎn)生影響??蛻?hù)可根據實(shí)際情況適當調整離心力和時(shí)間,參考離心力和時(shí)間范圍為:500-1000 g、20-30 min。

6. 將血液和淋巴細胞分離液混合一定時(shí)間后,出現紅細胞沉降屬于正?,F象。

7. 為了您的健康和安全,操作時(shí)請穿好實(shí)驗服、戴好手套。



附圖:分離前后,各層示意圖


圖片2.png



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