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產(chǎn)品詳情
操作說(shuō)明
注意事項
產(chǎn)品描述
本產(chǎn)品是適用于大鼠和小鼠外周血淋巴細胞分離的梯度密度分離液，其原理主要是根據外周血不同細胞之間的密度差異（紅細胞和粒細胞密度大約為1.090 g/mL；血小板密度1.030-1.035 g/mL；淋巴細胞和單核細胞密度1.075-1.090 g/mL），通過(guò)梯度密度離心，將淋巴細胞從外周血中分離出來(lái)。本產(chǎn)品為無(wú)菌、低內毒素水平的即用型分離液，液密度為1.083 ± 0.001 g/mL（20℃）。嚙齒動(dòng)物的淋巴細胞密度稍高于人淋巴細胞，且小鼠外周血分離易溶血。根據這些特性，本產(chǎn)品在傳統Ficoll-泛影葡胺基礎上進(jìn)行了優(yōu)化，能夠在血液加入后較長(cháng)的時(shí)間內維持分離液的穩定性，且使用操作簡(jiǎn)單且分離的淋巴細胞純度高、狀態(tài)好。
儲存與運輸
冰袋(wet ice)運輸；2-8℃避光保存，有效期12個(gè)月。
操作步驟
以分離1 mL鼠類(lèi)外周血淋巴細胞分離為例，血液和淋巴細胞分離液體積比為1:1-1:2，在此范圍內適當調整；選擇離心管時(shí)需注意，血液和淋巴細胞分離液總體積不超過(guò)離心管容積的三分之二。
1. 取新鮮抗凝全血（肝素、EDTA、枸櫞酸鈉等抗凝劑皆可）1 mL，加入等體積PBS或者無(wú)鈣鎂Hanks緩沖液稀釋?zhuān)吹玫? mL稀釋的全血；
2. 吸取大小鼠外周血淋巴細胞分離液3 mL加入到15 mL無(wú)菌離心管中；
3. 將離心管傾斜45°，將2 mL稀釋后的血液沿管壁緩慢加入到離心管中，使血液平鋪在大小鼠外周血淋巴細胞分離液上層；
4. 建議使用水平轉頭離心機離心，將離心管置于水平轉頭適配器中，降低離心機加減速（3-5檔為宜），室溫條件下800 g離心25 min；
5. 離心后，輕拿離心管置于管架上，可觀(guān)察到明顯的分層現象：最上層是血漿層；中上白膜層是淋巴細胞層；中下層為淋巴細胞分離液層；最下層為紅細胞和粒細胞層（參考附圖）；
6. 吸除最上層血漿層，小心吸取白膜層（淋巴細胞層）到另外一個(gè)潔凈的無(wú)菌離心管；
7. 用8 mL PBS或其他緩沖液洗滌后，100 g離心10 min，棄上清；
8. 重復步驟7（可選）
9. 根據實(shí)驗目的用所需培養基或緩沖液重懸淋巴細胞。
注意事項
1. 本產(chǎn)品在使用前需室溫充分平衡并顛倒混勻，分離時(shí)溫度以18-25℃為宜。
2. 為保持淋巴細胞的活性，血液最好選取采血2 h以?xún)鹊男迈r抗凝血液；如需對分離的淋巴細胞進(jìn)行進(jìn)一步的培養和檢測，請在采血和分離的過(guò)程中注意無(wú)菌操作。
3. 稀釋或洗滌緩沖液，不可使用含鈣、鎂離子的緩沖液，以免導致血細胞凝聚。
4. 過(guò)多的吸取白膜層以外的成分，會(huì )導致交界處的一些粒細胞或血小板等被混入。
5. 由于不同血液樣本間的差異，可能對分離效果產(chǎn)生影響?？蛻?hù)可根據實(shí)際情況適當調整離心力和時(shí)間，參考離心力和時(shí)間范圍為：500-1000 g、20-30 min。
6. 將血液和淋巴細胞分離液混合一定時(shí)間后，出現紅細胞沉降屬于正?，F象。
7. 為了您的健康和安全，操作時(shí)請穿好實(shí)驗服、戴好手套。
附圖：分離前后，各層示意圖
本產(chǎn)品僅供科研用途，不用于臨床診斷！
凡合肥萬(wàn)物生物科技有限公司銷(xiāo)售的產(chǎn)品均有嚴格的質(zhì)量保證。如發(fā)現產(chǎn)品存在包裝規格疑問(wèn)，請于收貨之日起七日內向我公司總部或當地辦事處提出，并請保證該產(chǎn)品，以備本公司進(jìn)行核對檢驗。如果發(fā)現有質(zhì)量問(wèn)題，請于收貨后一月內保留產(chǎn)品50%以上的量，以便本公司回收產(chǎn)品進(jìn)行質(zhì)檢，確認產(chǎn)品質(zhì)量。如逾期，則視為已經(jīng)對本公司產(chǎn)品進(jìn)行驗收。 聲明：如發(fā)生產(chǎn)品索賠事宜，本公司僅在產(chǎn)品價(jià)格范圍內酌情賠償，恕不接受超出產(chǎn)品價(jià)格范圍之賠償?？蛻?hù)在使用過(guò)程中有任何技術(shù)問(wèn)題可以撥打技術(shù)售后服務(wù)電話(huà)我們隨時(shí)給予解答。
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