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產(chǎn)品詳情
操作說(shuō)明
注意事項
產(chǎn)品描述
本試劑盒提供了簡(jiǎn)單而又快速的10% SDS-PAGE彩色(綠色)凝膠配制試劑，能夠同時(shí)制備下層膠(即分離膠)和上層膠(也稱(chēng)濃縮膠、積成膠)，用戶(hù)只需準備制膠設備，即可快速制備蛋白凝膠。同時(shí)，試劑盒中上層膠溶液B中含有綠色染料，使得蛋白點(diǎn)樣孔清晰呈現，實(shí)現了加樣過(guò)程的可視化，極大的提高了加樣效率。該綠色染料可在上層膠中穩定存在，不會(huì )隨著(zhù)電泳而遷移至下層膠，不會(huì )影響電泳和染色效果，電泳完成后也便于識別上層膠并切除，不影響后續Western Blot等實(shí)驗。
本試劑盒可制備常規尺寸的凝膠50塊，具體配制的凝膠塊數量與凝膠的厚薄以及凝膠的大小有關(guān)。
儲存與運輸
冰袋（wet ice）運輸；
4℃避光保存，有效期12個(gè)月。
操作步驟
1. 根據目的蛋白分子量和所選電泳緩沖液不同，選擇合適濃度的SDS-PAGE下層膠，參照表格如下：
|
SDS-PAGE分離膠濃度 |
最佳分離范圍（kDa） （Tris-Glycine電泳緩沖液） |
最佳分離范圍（kDa） （SWE快速高分辨電泳緩沖液） |
|
6% |
50-300 |
15-300 |
|
8% |
30-130 |
10-250 |
|
10% |
20-100 |
5-150 |
|
12% |
10-60 |
3-100 |
|
15% |
<40 |
<60 |
2. 配制10% AP溶液：稱(chēng)取AP（過(guò)硫酸銨）粉末0.1 g，用1 mL水完全溶解。該溶液4℃存貯1-2周有效，-20℃保存3個(gè)月有效；
3. 根據實(shí)驗需求，等比例混合溶液A和B，加入適量的10% AP溶液（100倍稀釋?zhuān)?，分別配制下層膠溶液、上層膠溶液。不同規格以及不同厚度的玻璃板可以等比例調整上層膠和下層膠溶液的配制體積，以常用規格8.3 cm×7.3 cm凝膠板（單塊）為例，推薦配制體系如下表格：
|
配制組別 |
組分 |
0.75 mm玻璃板 |
1.0 mm玻璃板 |
1.5 mm玻璃板 |
|
下層膠溶液 |
6%下層膠溶液A |
2 mL |
2.5 mL |
4 mL |
|
6%下層膠溶液B |
2 mL |
2.5 mL |
4 mL |
|
|
10% AP |
40 μL |
50 μL |
80 μL |
|
|
上層膠溶液 |
上層膠溶液A |
1 mL |
1 mL |
1.5 mL |
|
上層膠溶液B(綠色) |
1 mL |
1 mL |
1.5 mL |
|
|
10% AP |
20 μL |
20 μL |
30 μL |
4. 裝配好凝膠制具，先加入配制好的下層膠溶液，并立即緩慢均勻的加入配制好的上層膠溶液（也可使用蒸餾水封住下層膠液面，待下層膠凝固充分后再加入配制好的上層膠溶液，約15-30 min），插入梳子，待其凝固（約15-30 min左右）后即可使用；
5. 配制完成的凝膠如不能當天使用，可4℃保存1-2天。
6. 推薦電泳條件：
a. 使用SWE快速高分辨電泳緩沖液進(jìn)行電泳：200-250 V，25-35 min；
b. 使用Tris-Glycine電泳緩沖液進(jìn)行電泳：上層膠90 V，約30 min（marker進(jìn)入分離膠）；下層膠150-180 V，約60-90 min(可根據實(shí)際情況調整)。
注意事項
1. 上層膠溶液B長(cháng)時(shí)間靜置容易產(chǎn)生絮狀沉淀，使用前請輕輕顛倒混勻。
2. 上層膠溶液B和下層膠溶液B均含有SDS，使用時(shí)請勿劇烈搖晃，避免產(chǎn)生氣泡，從而影響凝膠灌制。
3. 預混液中存在單體丙烯酰胺，對人體有害，操作時(shí)請注意做好防護措施。
4. 為了保證樣本同時(shí)進(jìn)入分離膠，直接灌制上層膠時(shí)需緩慢均勻的加入配制好的上層膠溶液。
5. 加入AP之后盡快灌制凝膠，請勿長(cháng)時(shí)間放置。
6. 膠的凝固與溫度有顯著(zhù)的正相關(guān)性。同等條件下，溫度越高，凝固速度越快。
7. 如需進(jìn)一步加快凝膠速度，臨配膠前可按需補充適量TEMED，同時(shí)增加0.5倍10% AP使用量。
8. 本公司同時(shí)提供其他彩色（紅色、黃色、藍色）上層膠溶液，以區別不同樣本不同凝膠電泳。
9. 為了您的安全和健康，請穿實(shí)驗服并戴一次性手套操作。
本產(chǎn)品僅供科研用途，不用于臨床診斷！
凡合肥萬(wàn)物生物科技有限公司銷(xiāo)售的產(chǎn)品均有嚴格的質(zhì)量保證。如發(fā)現產(chǎn)品存在包裝規格疑問(wèn)，請于收貨之日起七日內向我公司總部或當地辦事處提出，并請保證該產(chǎn)品，以備本公司進(jìn)行核對檢驗。如果發(fā)現有質(zhì)量問(wèn)題，請于收貨后一月內保留產(chǎn)品50%以上的量，以便本公司回收產(chǎn)品進(jìn)行質(zhì)檢，確認產(chǎn)品質(zhì)量。如逾期，則視為已經(jīng)對本公司產(chǎn)品進(jìn)行驗收。 聲明：如發(fā)生產(chǎn)品索賠事宜，本公司僅在產(chǎn)品價(jià)格范圍內酌情賠償，恕不接受超出產(chǎn)品價(jià)格范圍之賠償?？蛻?hù)在使用過(guò)程中有任何技術(shù)問(wèn)題可以撥打技術(shù)售后服務(wù)電話(huà)我們隨時(shí)給予解答。
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