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產(chǎn)品簡(jiǎn)介
胰蛋白酶(Trypsin)簡(jiǎn)稱胰酶,是一種絲氨酸水解酶,能把多肽鏈中賴氨酸和精氨酸殘基中的羧基端切斷。在組織細(xì)胞的提取、培養(yǎng),以及體外細(xì)胞培養(yǎng)過程中,均會(huì)使用到胰蛋白酶消化液,用于水解細(xì)胞間蛋白質(zhì),使組織或細(xì)胞離散成單個(gè)細(xì)胞。胰酶在37℃ pH 8.0條件下消化能力最強(qiáng)。常用胰酶工作濃度為0.25%。EDTA可以螯合鈣鎂離子,胰酶溶液中搭配EDTA使用可以加速細(xì)胞間連接蛋白的水解,起到增強(qiáng)消化的效果。酚紅是一種pH指示劑,溶液偏堿性時(shí)呈紫紅色,偏酸性時(shí)呈橘紅色,近中性時(shí)呈粉紅色。
本產(chǎn)品為0.25%胰蛋白酶消化液,含0.25%胰蛋白酶,溶于Hank’s緩沖液,不含EDTA,無酚紅指示劑,經(jīng)0.22 μm過濾除菌。
儲(chǔ)存與運(yùn)輸
干冰(dry ice)運(yùn)輸;-20℃保存,有效期12個(gè)月。避免反復(fù)凍融。
操作說明
貼壁細(xì)胞
1. 吸去細(xì)胞培養(yǎng)液,用無菌的PBS、Hanks液或無血清培養(yǎng)液洗滌細(xì)胞去除殘余的血清。
2. 加入適量本產(chǎn)品覆蓋細(xì)胞,室溫靜置消化1-5 min。
3. 顯微鏡下觀察,當(dāng)細(xì)胞出現(xiàn)明顯收縮,用移液槍輕輕吹打細(xì)胞較容易將細(xì)胞吹打下來時(shí),吸除胰酶細(xì)胞消化液,加入含血清的細(xì)胞培養(yǎng)液,輕輕吹打下細(xì)胞,制成細(xì)胞懸液,即可直接傳代培養(yǎng)。如果用移液槍輕輕吹打時(shí)很難使細(xì)胞從板底脫落,表明消化時(shí)間不夠,可加入胰酶細(xì)胞消化液重新消化。切忌避免過度消化。
注意事項(xiàng)
1. 由于組織或細(xì)胞性質(zhì)不同,實(shí)驗(yàn)人員應(yīng)依據(jù)具體情況,確定最佳消化時(shí)間;消化細(xì)胞時(shí)間不宜過長,否則會(huì)影響細(xì)胞貼壁和生長狀況。
2. 本產(chǎn)品不含抑菌劑,在使用過程中要特別注意無菌操作,避免消化液被微生物污染。
3. 本產(chǎn)品不宜4℃長期保存,避免反復(fù)凍融,建議分裝成小份后-20℃保存。
4. 對(duì)于胰酶中EDTA、酚紅的選擇,可以根據(jù)實(shí)驗(yàn)需要,對(duì)于一般的腫瘤細(xì)胞,選擇含EDTA的胰酶消化液。對(duì)于較敏感、脆弱的細(xì)胞,例如原代細(xì)胞及很容易消化的細(xì)胞,選擇不含EDTA的胰酶消化液,如果細(xì)胞特別敏感,需要選擇胰蛋白酶濃度更低的消化液。如果是需要用于流式細(xì)胞儀檢測(cè)細(xì)胞凋亡,則選用不含EDTA的胰酶消化液。
5. 由于Hank’s溶液中NaHCO3含量較低,不建議將本產(chǎn)品用于37℃的CO2培養(yǎng)箱中消化,如果放入CO2相,溶液會(huì)迅速變酸性。
6. 為了您的安全和健康,請(qǐng)穿實(shí)驗(yàn)服并戴一次性手套操作。
產(chǎn)品僅供科研用途,不用于臨床診斷!
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