小鼠胚胎肝細(xì)胞

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貨號(hào)：

tings-1277

產(chǎn)品規(guī)格：

1*10?6

品牌：

萬(wàn)物

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產(chǎn)品詳情操作說(shuō)明注意事項(xiàng)

細(xì)胞介紹
在用鳥氨酸和苯丙氨酸代替精氨酸和酪氨酸的平板上選擇建立了這株細(xì)胞。檢測(cè)表明肢骨發(fā)育畸形病毒(鼠痘)陰性。

細(xì)胞特性
1）來(lái)源：小鼠肝
2）形態(tài)：上皮細(xì)胞樣
3）含量：>1x106 個(gè)/mL
4）污染：支原體、細(xì)菌、酵母和真菌檢測(cè)為陰性
5）規(guī)格：T75瓶或者1mL凍存管包裝

運(yùn)輸和保存

（1）使用T25瓶充液發(fā)送活細(xì)胞。

（2）收到細(xì)胞后，請(qǐng)先在顯微鏡下檢查細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)，并將T25瓶置于培養(yǎng)箱約6h或過(guò)夜后，再次檢查細(xì)胞狀態(tài)。若狀態(tài)良好，可進(jìn)行細(xì)胞后續(xù)處理操作，按照以下方式進(jìn)行。若發(fā)現(xiàn)可疑污染物，請(qǐng)及時(shí)與我們?nèi)〉寐?lián)系。

細(xì)胞用途：僅供科研使用。

細(xì)胞培養(yǎng)步驟
一．培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備：
1）準(zhǔn)備DMEM-H培養(yǎng)基(DMEM-H，GIBCO，貨號(hào)12800017，添加NaHCO3 1.5g/L)，90%；胎牛血清，10%，添加1% PS。
2）培養(yǎng)條件：氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。溫度：37攝氏度，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3）凍存液：90%完全培養(yǎng)基，10%DMSO，現(xiàn)用現(xiàn)配。液氮儲(chǔ)存。
二．細(xì)胞處理：
1）復(fù)蘇細(xì)胞：將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍，加入4mL培養(yǎng)基混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過(guò)夜（或?qū)⒓?xì)胞懸液加入250px皿中，加入約8ml培養(yǎng)基，培養(yǎng)過(guò)夜）。第二天換液并檢查細(xì)胞密度。
2）細(xì)胞傳代：如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%，即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。
對(duì)于貼壁細(xì)胞，傳代可參考以下方法：
1. 棄去培養(yǎng)上清，用不含鈣、鎂離子的PBS潤(rùn)洗細(xì)胞1-2次。
2. 加2ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養(yǎng)瓶中，置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2分鐘，然后在顯微鏡下觀察細(xì)胞消化情況，若細(xì)胞大部分變圓并脫落，迅速拿回操作臺(tái)，輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加少量培養(yǎng)基終止消化。
3. 按6-8ml/瓶補(bǔ)加培養(yǎng)基，輕輕打勻后吸出，在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻。
4. 將細(xì)胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
3）細(xì)胞凍存：待細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)良好時(shí)，可進(jìn)行細(xì)胞凍存。貼壁細(xì)胞凍存時(shí)，棄去培養(yǎng)基后加入少量胰酶，細(xì)胞變圓脫落后，加入約1ml含血清的培養(yǎng)基后加入凍存管中，再添加10%DMSO后進(jìn)行凍存。

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