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A549 人肺癌細胞

價(jià)格: 在線(xiàn)咨詢(xún)
貨號:
tings-1618404
產(chǎn)品規格:
1*10?6
購買(mǎi)數量:
產(chǎn)品詳情 操作說(shuō)明 注意事項
細胞介紹

該細胞系由D.J.Griad通過(guò)肺癌組織移植培養建系,患者為58歲白人男性。A549能通過(guò)胞苷二磷酸膽堿途徑合成含有高含量不飽和脂肪酸的卵磷脂。

細胞特性

1) 來(lái)源:肺癌

2) 形態(tài):上皮細胞樣,多角形;貼壁生長(cháng)

3) 含量:>1x106  細胞數

4) 規格:T25瓶或者1mL凍存管包裝

5)用途:僅供科研使用。

運輸和保存

干冰運輸及復蘇好存活細胞

(1)1mL凍存管包裝干冰運輸,收到后-80度冰箱保存過(guò)夜后轉入液氮或直接復蘇,若發(fā)現干冰已揮發(fā)干凈、凍存管瓶蓋脫落、破損及細胞有污染,請立即與我們聯(lián)系。

(2)T25瓶復蘇的存活細胞常溫發(fā)貨,收到后按照細胞接收后的處理方法操作。

細胞接收后的處理

1)收到細胞后,75%酒精消毒瓶壁將T25瓶置于37℃培養箱放置約2-3h,若發(fā)現培養瓶破損、有液溢出及細胞有污染,請拍照后及時(shí)聯(lián)系我們。

2)請在4或5X顯微鏡下確認細胞狀態(tài),同時(shí)給剛收到的細胞拍照(10×,20×)各2-3張以及培養瓶外觀(guān)照片一張留存,作為售后時(shí)收到時(shí)細胞狀態(tài)的依據。

3)貼壁細胞:細胞在37℃培養箱中放置2-3h,顯微鏡下觀(guān)察細胞的生長(cháng)和貼壁情況,有些貼壁細胞在快遞運送過(guò)程中會(huì )因振動(dòng)脫落和脫落后成團的情況。若鏡下觀(guān)察細胞的生長(cháng)密度若在60%以下,可去除培養瓶中灌液培養基(若有未貼壁的細胞需要離心回收,重懸打入到原培養瓶中),加入新配制的完全培養基6-8mL,放到細胞培養箱中繼續培養。若細胞生長(cháng)密度達70%-80%以上,可以對細胞進(jìn)行傳代處理。傳代過(guò)程中,若因運輸振動(dòng)脫落的細胞需要離心回收。

4)備注:運輸用的培養基(灌液培養基)不能再用來(lái)培養細胞,請換用按照說(shuō)明書(shū)細胞培養條件新配制的完全培養基來(lái)培養細胞。  收到細胞后第一次傳代建議T25培養瓶1:2傳代 。                       

一.培養基及培養凍存條件準備:

1) 準備F-12K培養基;優(yōu)質(zhì)胎牛血清,10%;雙抗,1%。

2) 培養條件: 氣相:空氣,95%;二氧化碳,5%。 溫度:37℃,培養箱濕度為70%-80%。

3) 凍存液:90%血清,10%DMSO,現用現配。

二、細胞處理:

1) 凍存細胞的復蘇:

將含有1mL細胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍,加入到含4-6mL完全培養基的離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心3-5min,棄去上清液,完全培養基重懸細胞。然后將細胞懸液加入含6-8ml完全培養基的培養瓶(或皿)中37℃培養過(guò)夜。第二天顯微鏡下觀(guān)察細胞生長(cháng)情況和細胞密度。

2) 細胞傳代:如果細胞密度達80%-90%,即可進(jìn)行傳代培養。

對于貼壁細胞傳代可以參考以下方法:

1. 棄去培養上清,用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細胞1-2次。

2. 加入0.25%(w / v)胰蛋白酶-0.53 mM EDTA于培養瓶中(T25瓶1-2mL,T75瓶2-3mL),置于37℃培養箱中消化1-2分鐘(難消化的細胞可以適當延長(cháng)消化時(shí)間),然后在顯微鏡下觀(guān)察細胞消化情況,若細胞大部分變圓并脫落,迅速拿回操作臺,輕敲幾下培養瓶后加入3-4ml含10%FBS的培養基來(lái)終止消化。

3.輕輕打勻后吸出,在1000RPM條件下離心3-5min,棄去上清液,補加1-2mL培養液后吹勻。將細胞懸液按1:2的比例分到新T25瓶中,添加6-8ml按照說(shuō)明書(shū)要求配置的新的完全培養基以保持細胞的生長(cháng)活力,后續傳代根據實(shí)際情況按1:2~1:5的比例進(jìn)行。

3)細胞凍存: 收到細胞后建議在培養前3代時(shí)凍存一批細胞種子以備后續實(shí)驗使用。

下面T25瓶為例;

1. 細胞凍存時(shí)按照細胞傳代的過(guò)程收集消化好的細胞到離心管中,可使用血球計數板計數,來(lái)決定細胞的凍存密度。一般細胞的推薦凍存密度為1×106~1×107個(gè)活細胞/ml.

2. 1000rpm離心3-5min,去掉上清。用配制好的細胞凍存液重懸細胞 ,按每1ml凍存液含1×106~1×107個(gè)活細胞/ml分配到一個(gè)凍存管中將細胞分配到凍存管中,標注好名稱(chēng)、代數、日期等信息。

3. 將要凍存的細胞置于程序降溫盒中,-80度冰箱中過(guò)夜,之后轉入液氮容器中儲存。同時(shí)記錄好凍存管在液氮容器中的位置以便后續查閱和使用。
1.收到細胞后,若發(fā)現干冰已揮發(fā)干凈、凍存管瓶蓋脫落、破損及細胞有污染,請立即與我們聯(lián)系。

2.收到細胞先不開(kāi)瓶蓋,瓶身擦拭酒精后放在培養箱靜置2-4小時(shí)(視細胞密度而定)穩定細胞狀態(tài)。接著(zhù)在倒置顯微鏡下觀(guān)察細胞生長(cháng)情況,并對細胞進(jìn)行不同倍數拍照(建議收細胞時(shí)就整體外觀(guān)拍一張照片,觀(guān)察培養基的顏色和是否有漏液情況,隨后在顯微鏡下拍下細胞狀態(tài),100*,200*各一張),觀(guān)察記錄細胞在運輸過(guò)程中是否有污染情況。作為我方進(jìn)行銷(xiāo)售依據。

3.由于細胞狀態(tài)受環(huán)境、操作和運輸等多方面因素影響,故本公司只保證客戶(hù)收到細胞后一周內的細胞狀態(tài),故客戶(hù)需要售后時(shí)需出示收到細胞的時(shí)間證明及客戶(hù)提供收貨時(shí)間和發(fā)現問(wèn)題后客服人員溝通的時(shí)間證明,期間間隔時(shí)間不能大于7天。

4.所有動(dòng)物細胞均視為有潛在的生物危害性,必須在二級生物安全臺內操作,并請注意防護,所有廢液及接觸過(guò)此細胞的器皿需要滅菌后方能丟棄。


1.所有細胞免費售后期為一周,一周內細胞培養出現異常及時(shí)拍照反饋。超出一周沒(méi)有任何反饋視為細胞培養正常,后期若出現培養問(wèn)題不再免費重發(fā)。

2. 申請售后時(shí)請提供細胞收貨時(shí)及反饋售后當天細胞清晰照片及培養信息,若無(wú)清晰照片及相應信息,不予免費售后;若文件較多不方便在線(xiàn)聯(lián)系或傳送,可以向銷(xiāo)售索要細胞情況表,填寫(xiě)后反饋給銷(xiāo)售。

3. 售后僅針對由于細胞自身狀態(tài)問(wèn)題導致不可傳代的情況,若客戶(hù)收貨一周內已經(jīng)傳代或轉移細胞多次,出現死亡或者污染時(shí)不予免費售后;若客戶(hù)在我方未允許的情況下,擅自遺棄細胞,視為客戶(hù)自身問(wèn)題導致細胞異常,不予免費售后。

4. 細胞在不同實(shí)驗室培養由于所使用培養基及血清品牌、個(gè)人操作習慣、培養瓶品牌等諸多培養條件不盡相同,導致細胞培養形態(tài)、生長(cháng)速度、貼壁情況均可能有所差異,對于此類(lèi)細胞適應環(huán)境生長(cháng)的行為,不予過(guò)度解釋或免費售后。

5. 凍存細胞發(fā)貨2管,客戶(hù)先復蘇一支,若復蘇失敗及時(shí)聯(lián)系我方并在我方指導下復蘇第二支。若客戶(hù)未反饋并復蘇2管失敗,我方將不提供免費售后服務(wù)。凍存細胞售后均發(fā)復蘇培養的,若要重發(fā)凍存細胞,需補加干冰運輸費用。

6. 客戶(hù)自行凍存細胞一定要注意凍存后復蘇一管檢查凍存活性,避免凍存死亡導致絕種。我方不對客戶(hù)凍存細胞死亡負責,客戶(hù)凍存細胞死亡時(shí)不予免費售后。

7. 細胞收貨后,請收集發(fā)貨培養基培養至少一瓶細胞,用于確定細胞培養條件及實(shí)驗操作是否合適。

凡合肥萬(wàn)物生物科技有限公司銷(xiāo)售的產(chǎn)品均有嚴格的質(zhì)量保證。如發(fā)現產(chǎn)品存在包裝規格疑問(wèn),請于收貨之日起七日內向我公司總部或當地辦事處提出,并請保證該產(chǎn)品,以備本公司進(jìn)行核對檢驗。如果發(fā)現有質(zhì)量問(wèn)題,請于收貨后一月內保留產(chǎn)品50%以上的量,以便本公司回收產(chǎn)品進(jìn)行質(zhì)檢,確認產(chǎn)品質(zhì)量。如逾期,則視為已經(jīng)對本公司產(chǎn)品進(jìn)行驗收。 聲明:如發(fā)生產(chǎn)品索賠事宜,本公司僅在產(chǎn)品價(jià)格范圍內酌情賠償,恕不接受超出產(chǎn)品價(jià)格范圍之賠償??蛻?hù)在使用過(guò)程中有任何技術(shù)問(wèn)題可以撥打技術(shù)售后服務(wù)電話(huà)我們隨時(shí)給予解答。

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