服務(wù)熱線
400-1016-218
聯(lián)系方式
- 手機：400-1016-218
- Q Q：355185756
- 郵箱：355185756@qq.com
- 地址：安徽省合肥市高新區(qū)黃山路602號合肥國家大學(xué)科技園A401室
產(chǎn)品詳情
操作說明
注意事項
細胞介紹
人胃癌細胞KATO III，來源于55歲的亞洲男性的轉(zhuǎn)移性胃癌，來源部位：胸腔積液、鎖骨及腋窩淋巴結(jié)和道格拉斯氏陷凹(Douglas cul-de-sac)
細胞特性
1） 來源：胃癌
2） 形態(tài)：上皮細胞樣
3） 含量：>1x106
4） 污染：支原體、細菌、酵母和真菌檢測為陰性
5） 規(guī)格：T25瓶或者1mL凍存管包裝
運輸和保存
1)使用含有優(yōu)質(zhì)胎牛血清的2ml凍存管發(fā)送存活細胞。
2)收到細胞后，可在1000RPM，常溫條件下，離心5min后，于潔凈操作臺棄去上清，加入推薦使用的培養(yǎng)基后轉(zhuǎn)移至T25培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)，傳代達到細胞生長狀態(tài)良好時，再進行凍存。具體操作見細胞培養(yǎng)步驟。
3)收到細胞后請拍照，3天內(nèi)如果發(fā)現(xiàn)污染，請及時拍照與我們聯(lián)系。
細胞用途：僅供科研使用。
細胞接收后的處理：
1） 收到細胞后，請檢查發(fā)貨培養(yǎng)瓶的狀況，若發(fā)現(xiàn)培養(yǎng)瓶破損、有液溢出及細胞有污染，請拍照后及時聯(lián)系我們。
2） 在顯微鏡下確認細胞生長狀態(tài)時，最好在低倍鏡（4或5X物鏡)下進行，能準確判斷細胞的傳代密度?？醇毎男螒B(tài)請在10X和20×物鏡下，同時給細胞拍照各2-3張（10×，20×都要拍照），作為售后的依據(jù)。
3） 觀察好細胞狀態(tài)后，75%酒精消毒瓶壁將T25瓶置于37℃培養(yǎng)箱放置約2-3h。
4） 貼壁細胞：在運輸過程中貼壁細胞會有脫落的現(xiàn)象，如發(fā)現(xiàn)貼壁細胞有脫落或者脫落后抱團生長，可將T25瓶置于37℃培養(yǎng)箱放置約2-3h，然后抽出瓶中的培養(yǎng)基和未貼壁細胞1000rpm離心5分鐘，棄去上清重懸后接種到加有按照說明書細胞培養(yǎng)條件新配制的完全培養(yǎng)基的原培養(yǎng)瓶中（或新的培養(yǎng)瓶中）。
5） 懸浮細胞：T25瓶置于37℃培養(yǎng)箱放置約2-3h，然后抽出瓶中的培養(yǎng)基和細胞1000rpm離心5分鐘，棄去上清重懸后接種到新的培養(yǎng)瓶中（加入按照說明書細胞培養(yǎng)條件新配制的完全培養(yǎng)基）。
6）備注：運輸用的培養(yǎng)基（灌液培養(yǎng)基）不能再用來培養(yǎng)細胞，請換用按照說明書細胞培養(yǎng)條件新配制的完全培養(yǎng)基來培養(yǎng)細胞。 收到細胞后第一次傳代建議1：2傳代 。
細胞培養(yǎng)步驟
一．培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準備：
1） 準備RPMI-1640培養(yǎng)基；優(yōu)質(zhì)胎牛血清，10%；雙抗，1%。
2） 培養(yǎng)條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37攝氏度，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3） 凍存液：90%血清，10%DMSO，現(xiàn)用現(xiàn)配。
二． 細胞處理：
1） 復(fù)蘇細胞：將含有1mL細胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍，加入4mL培養(yǎng)基混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補加1-2mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜（或?qū)⒓毎麘乙杭尤?50px皿中，加入約8ml培養(yǎng)基，培養(yǎng)過夜）。第二天換液并檢查細胞密度。
2） 細胞傳代：如果細胞密度達80%-90%，即可進行傳代培養(yǎng)。
對于貼壁細胞，傳代可參考以下方法：
1. 棄去培養(yǎng)上清，用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細胞1-2次。
2. 加2ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養(yǎng)瓶中，置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2分鐘，然后在顯微鏡下觀察細胞消化情況，若細胞大部分變圓并脫落，迅速拿回操作臺，輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加少量培養(yǎng)基終止消化。
3. 按6-8ml/瓶補加培養(yǎng)基，輕輕打勻后吸出，在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻。
4. 將細胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
注：第一次傳代推薦傳代比例為1:2，以后傳代比例可根據(jù)客戶需要自己決定。
下面T25瓶為例；
1．細胞凍存時，棄去培養(yǎng)基后，PBS清洗瓶底1-2次后加入1ml胰酶，細胞變圓脫落后，加入2ml完全培養(yǎng)基終止消化，可使用血球計數(shù)板計數(shù)。
2．1000RPM離心5分鐘去掉上清。用血清重懸浮，加DMSO至最終濃度為10%。加入DMSO后迅速混勻，按每1ml的數(shù)量分配到凍存管中，注意凍存管做好標識。本公司按每個凍存管細胞數(shù)目大于1X106個細胞凍存。
3．將凍存管置于程序降溫盒中，放入-80度冰箱，至少2個小時以后轉(zhuǎn)入液氮灌儲存。記錄凍存管位置以便下次拿取。
凡合肥萬物生物科技有限公司銷售的產(chǎn)品均有嚴格的質(zhì)量保證。如發(fā)現(xiàn)產(chǎn)品存在包裝規(guī)格疑問，請于收貨之日起七日內(nèi)向我公司總部或當?shù)剞k事處提出，并請保證該產(chǎn)品，以備本公司進行核對檢驗。如果發(fā)現(xiàn)有質(zhì)量問題，請于收貨后一月內(nèi)保留產(chǎn)品50%以上的量，以便本公司回收產(chǎn)品進行質(zhì)檢，確認產(chǎn)品質(zhì)量。如逾期，則視為已經(jīng)對本公司產(chǎn)品進行驗收。 聲明：如發(fā)生產(chǎn)品索賠事宜，本公司僅在產(chǎn)品價格范圍內(nèi)酌情賠償，恕不接受超出產(chǎn)品價格范圍之賠償?？蛻粼谑褂眠^程中有任何技術(shù)問題可以撥打技術(shù)售后服務(wù)電話我們隨時給予解答。
合肥萬物生物科技有限公司
客服熱線：400-1016-218
QQ：355185756
地址：安徽省合肥市高新區(qū)黃山路602號合肥國家大學(xué)科技園A401室