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本公司產(chǎn)品僅供科研使用
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產(chǎn)品簡(jiǎn)介
油紅O又名蘇丹紅5B,是一種脂溶性偶氮染料。該染料能特異性使細(xì)胞或組織內(nèi)的甘油三脂等中性脂質(zhì)著色,對(duì)于磷脂和類固醇等染色較弱,基本原理是油紅O溶于脂質(zhì)中使脂質(zhì)呈現(xiàn)紅色至橘紅色。
本產(chǎn)品飽和油紅O染液,是油紅O的飽和溶液,使用前經(jīng)蒸餾水稀釋后,可用于組織切片或細(xì)胞的染色,染色后組織內(nèi)的脂滴呈紅色至橘紅色。
儲(chǔ)存與運(yùn)輸
常溫避光保存與運(yùn)輸,有效期12個(gè)月。
使用方法
l 配制工作液:臨用前,6份飽和油紅O染液與4份蒸餾水充分混合均勻,置于60-70℃水浴30 min,自然冷卻后用定性濾紙過(guò)濾,得到油紅O工作液。需現(xiàn)配現(xiàn)用。另外,需自備60%異丙醇。
l 樣本準(zhǔn)備
1. 對(duì)于細(xì)胞:吸棄細(xì)胞培養(yǎng)液,向孔板邊緣緩慢加入PBS簡(jiǎn)單清洗細(xì)胞。加入4%多聚甲醛固定液室溫固定8-10 min,PBS漂洗2次。
2. 對(duì)于冰凍切片:切片從-20℃取出后室溫靜置5-10 min恢復(fù)至常溫。
l 染色步驟
1. 對(duì)于細(xì)胞
(1)向孔板內(nèi)加入少量60%異丙醇覆蓋細(xì)胞15-20 s,吸棄60%異丙醇,稍微晾干水分。
(2)向孔板內(nèi)加入油紅O工作液覆蓋細(xì)胞,室溫避光染色30 min,去除染色液。
(3)加入60%異丙醇快速分化3-5 s,純水洗3次,每次5 min。
(4)(可選)加入蘇木素染液對(duì)細(xì)胞核進(jìn)行染色,水洗,返藍(lán)再水洗。
(5)加入PBS覆蓋細(xì)胞后顯微鏡觀察。如果是細(xì)胞爬片,可用甘油明膠封片劑封片。
2. 對(duì)于冰凍切片
(1) 恢復(fù)至室溫的冰凍切片輕輕浸入油紅O工作液浸染8-10 min(加蓋避光)。
(2) 取出切片,停留3 s后依次浸入兩缸60%異丙醇分化3-5 s。
(3) 切片依次浸入兩缸純水中浸洗,每次10 s。
(4) (可選)切片浸入蘇木素染液對(duì)細(xì)胞核進(jìn)行染色,水洗,返藍(lán)再水洗,稍微晾干水分后滴加甘油明膠封片劑封片。
注意事項(xiàng)
1. 如果是新鮮組織冰凍切片,需要對(duì)切片先固定后再染色。
2. 油紅O工作液必須現(xiàn)配現(xiàn)用。加熱過(guò)程中一定要密封,防止溶劑揮發(fā)。
3. 整個(gè)操作過(guò)程中注意動(dòng)作輕緩,以免脂肪丟失或者移位。
4. 油紅O染色后的樣本不能長(zhǎng)期保存,應(yīng)盡快觀察及拍照。
5. 用甘油明膠封片劑封片時(shí)需注意,盡量避免產(chǎn)生氣泡,如果封片后有氣泡不能按壓玻片或強(qiáng)行撕扯蓋玻片,否則會(huì)造成脂肪移位??蓪⒉F?0-60℃溫水中,讓蓋玻片自行脫落,然后重新封片。
6. 為了您的安全和健康,操作時(shí)請(qǐng)穿實(shí)驗(yàn)服并佩戴一次性手套。
本產(chǎn)品僅供科研用途,不用于臨床診斷!
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