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品簡介
Hoechst 33258分子式為C25H24N6O·3HCl,分子量為533.88,CAS編號為23491-45-4,是一種可以穿透細(xì)胞膜的藍(lán)色熒光染料,當(dāng)與雙鏈DNA大溝結(jié)合以后熒光顯著增強(qiáng)。最大激發(fā)波長為346 nm,最大發(fā)射波長為460 nm。Hoechst 33258常用于細(xì)胞凋亡檢測,細(xì)胞核染色,或常規(guī)的DNA染色??捎糜诠潭?xì)胞、組織或非固定細(xì)胞、組織的細(xì)胞核染色,染色后可用熒光顯微鏡觀察,或流式細(xì)胞儀檢測。熒光顯微鏡觀察時用紫外光激發(fā),為藍(lán)色熒光。
本產(chǎn)品為即用型溶液,濃度經(jīng)優(yōu)化可滿足各種常規(guī)染色的需要。
儲存與運(yùn)輸
冰袋(wet ice)運(yùn)輸;4℃避光保存,有效期6個月。
操作步驟
1.對于固定的細(xì)胞或者組織切片:
a.對于固定的細(xì)胞或組織樣品,固定后去除固定液,使用PBS或者其他合適的緩沖液洗滌2-3次,每次3-5 min(如檢測懸浮細(xì)胞,請按懸浮細(xì)胞常規(guī)操作方式進(jìn)行,實驗均需添加離心等步驟);
b.(可選步驟)如需對固定的細(xì)胞或者組織進(jìn)行免疫熒光染色等處理,則優(yōu)先進(jìn)行相關(guān)處理,處理后再進(jìn)行Hoechst 33258染色;
c.直接取適量本產(chǎn)品Hoechst 33258染液(即用型)覆蓋樣品,室溫避光孵育5 min左右;
d.去除染液,用PBS或者其他合適的緩沖液洗滌2-3次,每次3-5 min;
e.封片后或者直接置于熒光顯微鏡下觀察,激發(fā)波長為350 nm,發(fā)射波長為460 nm。
2.對于活細(xì)胞或者培養(yǎng)組織:
a.細(xì)胞培養(yǎng)物中加入適量本產(chǎn)品Hoechst 33258染液(即用型),充分覆蓋待染色的樣品;通常六孔板一個孔中需加入1 mL染色液,96孔板一個孔中需加入100 μL染色液;于37℃培養(yǎng)箱中,孵育10-20 min;
b.去除染液,用PBS或者其他合適的緩沖液洗滌2-3次,每次3-5 min;
c.直接于熒光顯微鏡下觀察,激發(fā)波長為350 nm,發(fā)射波長為460 nm。
注意事項
1. 熒光染料都存在熒光淬滅的問題,建議染色后盡快完成拍照。為減緩熒光淬滅可以使用抗熒光淬滅封片劑。
2. 操作時請穿實驗服,佩戴一次性手套。
本產(chǎn)品僅供科研用途,不用于臨床診斷!
合肥萬物生物科技有限公司
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