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本公司產(chǎn)品僅供科研使用
您現(xiàn)在所在位置:主頁 > 產(chǎn)品中心 > 細(xì)胞 >>細(xì)胞系 >>人源細(xì)胞系 >> THP-1 人單核細(xì)胞白血病細(xì)胞
細(xì)胞介紹
該細(xì)胞對(duì)乳汁珠和激活的紅細(xì)胞有吞噬作用,無表面和胞質(zhì)免疫球蛋白??梢杂梅鸩ù?TPA誘導(dǎo)單核細(xì)胞分化。
細(xì)胞特性
1) 來源:急性單核細(xì)胞白血病,單核細(xì)胞
2) 形態(tài):單核細(xì)胞,懸浮
3) 含量:>1x10^6 細(xì)胞數(shù)
4) 規(guī)格:T25瓶或者1mL凍存管包裝
5) 用途:僅供科研使用。
運(yùn)輸和保存
干冰運(yùn)輸及復(fù)蘇好存活細(xì)胞
(1)1mL凍存管包裝干冰運(yùn)輸,收到后-80度冰箱保存過夜后轉(zhuǎn)入液氮或直接復(fù)蘇,若發(fā)現(xiàn)干冰已揮發(fā)干凈、凍存管瓶蓋脫落、破損及細(xì)胞有污染,請(qǐng)立即與我們聯(lián)系。
(2)T25瓶復(fù)蘇的存活細(xì)胞常溫發(fā)貨,收到后按照細(xì)胞接收后的處理方法操作。
細(xì)胞接收后的處理
1) 收到細(xì)胞后,75%酒精消毒瓶壁將T25瓶置于37℃培養(yǎng)箱放置約2-3h,若發(fā)現(xiàn)培養(yǎng)瓶破損、有液溢出及細(xì)胞有污染,請(qǐng)拍照后及時(shí)聯(lián)系我們。
2)請(qǐng)?jiān)?或5X顯微鏡下確認(rèn)細(xì)胞狀態(tài),同時(shí)給剛收到的細(xì)胞拍照(10×,20×)各2-3張以及培養(yǎng)瓶外觀照片一張留存,作為售后時(shí)收到時(shí)細(xì)胞狀態(tài)的依據(jù)。
3) 懸浮細(xì)胞:T25瓶置于37℃培養(yǎng)箱放置約2-3h,然后抽出瓶中的培養(yǎng)基和細(xì)胞1000rpm離心5分鐘,棄去上清重懸后接種到新的培養(yǎng)瓶中(加入按照說明書細(xì)胞培養(yǎng)條件新配制的完全培養(yǎng)基)。
4)備注:運(yùn)輸用的培養(yǎng)基(灌液培養(yǎng)基)不能再用來培養(yǎng)細(xì)胞,請(qǐng)換用按照說明書細(xì)胞培養(yǎng)條件新配制的完全培養(yǎng)基來培養(yǎng)細(xì)胞。 收到細(xì)胞后第一次傳代建議T25培養(yǎng)瓶1:2傳代 。
一.培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備:
1) 準(zhǔn)備RPMI-1640培養(yǎng)基;優(yōu)質(zhì)胎牛血清10%;0.05 mM β-巰基乙醇(細(xì)胞培養(yǎng)級(jí));雙抗1%。
2) 參考傳代比例:傳代時(shí)控制細(xì)胞密度在2-4 ×105cell / mL,并在細(xì)胞生長至8-10 ×105cell / mL時(shí)進(jìn)行傳代。
3) 參考換液頻率:傳代時(shí)換液
4) 培養(yǎng)條件: 氣相:空氣,95%;二氧化碳,5%。 溫度:37攝氏度,培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
5) 凍存液:完全培養(yǎng)液95%,DMSO 5%(使用該凍存液后,按照我?guī)斓慕?jīng)驗(yàn)復(fù)蘇存活率約50%,復(fù)蘇后需要額外培養(yǎng)7-10天才能恢復(fù)生長)
6) 【注意事項(xiàng)】:
該細(xì)胞為懸浮細(xì)胞,根據(jù)培養(yǎng)經(jīng)驗(yàn)以及客戶的反饋,傳代時(shí)使用【半換液法】對(duì)細(xì)胞狀態(tài)較為有利,因此我?guī)旖ㄗh您使用【半換液法】進(jìn)行傳代。
1. 您在收到我們提供的用15ml離心管發(fā)貨的細(xì)胞后,請(qǐng)不要通過離心的方式收集細(xì)胞,可以先準(zhǔn)備兩個(gè)新的T25培養(yǎng)瓶,然后將細(xì)胞混合均勻后移入兩個(gè)新的T25培養(yǎng)瓶中,補(bǔ)加培養(yǎng)基到10ml。放入到37℃培養(yǎng)箱中。
2. 您在收到的是用T25培養(yǎng)瓶發(fā)貨的細(xì)胞,請(qǐng)先通過離心的方式收集細(xì)胞,然后將細(xì)胞重懸加入12ml按照說明書要求配置的完全培養(yǎng)基吹打均勻后移入兩個(gè)新的T25培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)即可。
3. thp-1懸浮細(xì)胞。該細(xì)胞在培養(yǎng)時(shí)更喜歡溫和處理,培養(yǎng)時(shí)盡量少對(duì)細(xì)胞進(jìn)行離心處理以此造成對(duì)細(xì)胞的傷害。換液時(shí)不要全培養(yǎng)基更換,建議您使用【半換液法】進(jìn)行傳代,添加細(xì)胞培養(yǎng)基以稀釋細(xì)胞至維持密度即可。
4. 細(xì)胞對(duì)血清質(zhì)量較為敏感,我?guī)旖ㄗh您使用進(jìn)口大品牌優(yōu)質(zhì)血清進(jìn)行培養(yǎng)。FBS不要滅活,如果細(xì)胞生長緩慢請(qǐng)嘗試使用其他FBS或暫時(shí)將FBS濃度增加到20%
5.該細(xì)胞的培養(yǎng)液中需添加β-巰基乙醇(細(xì)胞培養(yǎng)級(jí)別),若不添加,可能會(huì)對(duì)細(xì)胞狀態(tài)造成影響。
β-巰基乙醇的穩(wěn)定性有限,不可將β-巰基乙醇添加到完全培養(yǎng)基中長期儲(chǔ)存,在每次傳代或液體添加時(shí)再添加β-巰基乙醇。
β-巰基乙醇(2-巰基乙醇)被添加到淋巴細(xì)胞或其他細(xì)胞培養(yǎng)物中,因?yàn)樵谂囵B(yǎng)基中使用的FBS中氨基酸半胱氨酸供不應(yīng)求,而胱氨酸則很多。有些細(xì)胞(例如T細(xì)胞)無法將半胱氨酸轉(zhuǎn)運(yùn)到細(xì)胞質(zhì)中,必須將其轉(zhuǎn)化為半胱氨酸。β-巰基乙醇將胱氨酸還原為可被細(xì)胞轉(zhuǎn)運(yùn)的形式,然后轉(zhuǎn)化為細(xì)胞生長所需的半胱氨酸。 β-巰基乙醇還是一種還原劑,可以分解培養(yǎng)中細(xì)胞產(chǎn)生的許多有毒代謝產(chǎn)物,從而改善細(xì)胞周圍的環(huán)境。
6.該細(xì)胞對(duì)細(xì)胞密度較為敏感,培養(yǎng)、傳代時(shí)請(qǐng)注意保持細(xì)胞密度在合適的范圍(具體請(qǐng)參考細(xì)胞說明書)。
7..該細(xì)胞凍存后復(fù)蘇率較低,凍存時(shí)請(qǐng)酌情提高細(xì)胞量
8.通常情況下可以通過向正在生長的細(xì)胞中添加完全培養(yǎng)基來維持細(xì)胞的生長,每7天可以將細(xì)胞離心并重懸于新配的培養(yǎng)基中,來完成細(xì)胞的全換液。
ATCC有關(guān)thp-1細(xì)胞保持細(xì)胞活力的說明
https://www.atcc.org/support/faqs/2ed94/Seeding%20density%20for%20TIB-202.aspx?device=modal
(頻繁的細(xì)胞計(jì)數(shù)是監(jiān)測(cè)thp-1的最佳方法。這些細(xì)胞應(yīng)該每2至3天通過向燒瓶中簡單加入少量新鮮培養(yǎng)基(使它們具有條件培養(yǎng)基)來培養(yǎng)。您不需要每次都離心細(xì)胞并重新傳代。當(dāng)在我們的實(shí)驗(yàn)室中培養(yǎng)時(shí),到第2天,細(xì)胞通??梢詳U(kuò)增到具有更多培養(yǎng)基的更大的燒瓶中。當(dāng)細(xì)胞密度達(dá)到8×10 5個(gè)活細(xì)胞/ ml時(shí)需要進(jìn)行傳代。不允許細(xì)胞密度超過1×10(6)活細(xì)胞/ ml。)
二. 細(xì)胞處理:
1) 凍存細(xì)胞的復(fù)蘇:
將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍,加入到含4-6mL完全培養(yǎng)基的離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心3-5min,棄去上清液,完全培養(yǎng)基重懸細(xì)胞。然后將細(xì)胞懸液加入含6-8ml完全培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶(或皿)中37℃培養(yǎng)過夜。第二天顯微鏡下觀察細(xì)胞生長情況和細(xì)胞密度。
2) 細(xì)胞換液: 通常情況下可以通過向正在生長的細(xì)胞中添加完全培養(yǎng)基來維持細(xì)胞的生長,每7天可以將細(xì)胞離心并重懸于新配的培養(yǎng)基中,來完成細(xì)胞的全換液。
3) 細(xì)胞傳代:傳代時(shí)控制細(xì)胞密度在2-4 ×10^5cell / mL,并在細(xì)胞生長至8-10 ×10^5cell / mL時(shí)進(jìn)行傳代。
3) 細(xì)胞凍存:待細(xì)胞生長狀態(tài)良好時(shí),可進(jìn)行細(xì)胞凍存。
1,細(xì)胞凍存時(shí),取上清,可使用血球計(jì)數(shù)板計(jì)數(shù)。
2,4min ,1000rpm 離心去掉上清。加1ml血清重懸細(xì)胞,根據(jù)細(xì)胞數(shù)量加入凍存液,輕輕混勻,DMSO終濃度為5%,細(xì)胞密度2x10^6/支,每支凍存管凍存1ml細(xì)胞懸液,注意凍存管做好標(biāo)識(shí)。
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