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EA.hy926 人臍靜脈細胞融合細胞

價(jià)格: 在線(xiàn)咨詢(xún)
貨號:
tings-16183
產(chǎn)品規格:
1*10?6?
購買(mǎi)數量:
產(chǎn)品詳情 操作說(shuō)明 注意事項

細胞介紹

在PEG脅迫下,將原代培養的人臍靜脈細胞與抗硫鳥(niǎo)嘌呤的A549克隆株融合,構建了人臍靜脈細胞株, EA.hy926。融合子在HAT培養基上生長(cháng)并以八因子相關(guān)抗原篩選。EA.hy926已經(jīng)過(guò)100次以上的群體倍增(PDLs)。電鏡照片顯示W(wǎng)eibel-Palade小體的細胞質(zhì)分布以及組織特異性的細胞器,分化的內皮細胞特性如血管生成,體內平衡/血栓形成,血壓及炎癥反應。 [PubMed: 6407019]

細胞特性

1) 來(lái)源:體細胞融合細胞

2) 形態(tài):內皮細胞樣,貼壁生長(cháng)

3) 含量:>1x10^6  細胞數

4) 規格:T25瓶或者1mL凍存管包裝

5)  用途:僅供科研使用。

運輸和保存

干冰運輸及復蘇好存活細胞

(1)1mL凍存管包裝干冰運輸,收到后-80度冰箱保存過(guò)夜后轉入液氮或直接復蘇,若發(fā)現干冰已揮發(fā)干凈、凍存管瓶蓋脫落、破損及細胞有污染,請立即與我們聯(lián)系。

(2)T25瓶復蘇的存活細胞常溫發(fā)貨,收到后按照細胞接收后的處理方法操作。

細胞接收后的處理

1)收到細胞后,75%酒精消毒瓶壁將T25瓶置于37℃培養箱放置約2-3h,若發(fā)現培養瓶破損、有液溢出及細胞有污染,請拍照后及時(shí)聯(lián)系我們。

2)請在4或5X顯微鏡下確認細胞狀態(tài),同時(shí)給剛收到的細胞拍照(10×,20×)各2-3張以及培養瓶外觀(guān)照片一張留存,作為售后時(shí)收到時(shí)細胞狀態(tài)的依據。

3)貼壁細胞:細胞在37℃培養箱中放置2-3h,顯微鏡下觀(guān)察細胞的生長(cháng)和貼壁情況,有些貼壁細胞在快遞運送過(guò)程中會(huì )因振動(dòng)脫落和脫落后成團的情況。若鏡下觀(guān)察細胞的生長(cháng)密度若在60%以下,可去除培養瓶中灌液培養基(若有未貼壁的細胞需要離心回收,重懸打入到原培養瓶中),加入新配制的完全培養基6-8mL,放到細胞培養箱中繼續培養。若細胞生長(cháng)密度達70%-80%以上,可以對細胞進(jìn)行傳代處理。傳代過(guò)程中,若因運輸振動(dòng)脫落的細胞需要離心回收。

4)備注:運輸用的培養基(灌液培養基)不能再用來(lái)培養細胞,請換用按照說(shuō)明書(shū)細胞培養條件新配制的完全培養基來(lái)培養細胞。  收到細胞后第一次傳代建議T25培養瓶1:2傳代 。

一.培養基及培養凍存條件準備

1) 準備DMEM (含NaHCO3 1.5g/L ;優(yōu)質(zhì)胎牛血清,10%;雙抗1%。

2) 培養條件: 氣相:空氣,95%;二氧化碳,5%。 溫度:37攝氏度,培養箱濕度為70%-80%。

3) 該細胞在DMEM(含1.5g/LNaHCO3)培養基中生長(cháng)良好,大部分品牌的DMEM含有較高濃度的NaHCO3(3.7g/L),若使用DMEM(3.7g/L NaHCO3)培養基培養細胞時(shí)需要提高CO2濃度(7%-10%)

4) 凍存液:90%血清,10%DMSO,現用現配。

二.細胞處理:

1) 凍存細胞的復蘇:

將含有1mL細胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍,加入到含4-6mL完全培養基的離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心3-5min,棄去上清液,完全培養基重懸細胞。然后將細胞懸液加入含6-8ml完全培養基的培養瓶(或皿)中37℃培養過(guò)夜。第二天顯微鏡下觀(guān)察細胞生長(cháng)情況和細胞密度。

2) 細胞傳代:如果細胞密度達80%-90%,即可進(jìn)行傳代培養。

對于貼壁細胞傳代可以參考以下方法:

1. 棄去培養上清,用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細胞1-2次。

2. 加入0.25%(w / v)胰蛋白酶-0.53 mM EDTA于培養瓶中(T25瓶1-2mL,T75瓶2-3mL),置于37℃培養箱中消化1-2分鐘(難消化的細胞可以適當延長(cháng)消化時(shí)間),然后在顯微鏡下觀(guān)察細胞消化情況,若細胞大部分變圓并脫落,迅速拿回操作臺,輕敲幾下培養瓶后加入3-4ml含10%FBS的培養基來(lái)終止消化。 

3.輕輕打勻后吸出,在1000RPM條件下離心3-5min,棄去上清液,補加1-2mL培養液后吹勻。將細胞懸液按1:2的比例分到新T25瓶中,添加6-8ml按照說(shuō)明書(shū)要求配置的新的完全培養基以保持細胞的生長(cháng)活力,后續傳代根據實(shí)際情況按1:2~1:5的比例進(jìn)行。

3)細胞凍存: 收到細胞后建議在培養前3代時(shí)凍存一批細胞種子以備后續實(shí)驗使用。

下面T25瓶為例;

1. 細胞凍存時(shí)按照細胞傳代的過(guò)程收集消化好的細胞到離心管中,可使用血球計數板計數,來(lái)決定細胞的凍存密度。一般細胞的推薦凍存密度為1×10^6~1×10^7個(gè)活細胞/ml.

2. 1000rpm離心3-5min,去掉上清。用配制好的細胞凍存液重懸細胞 ,按每1ml凍存液含1×10^6~1×10^7個(gè)活細胞/ml分配到一個(gè)凍存管中將細胞分配到凍存管中,標注好名稱(chēng)、代數、日期等信息。

3. 將要凍存的細胞置于程序降溫盒中,-80度冰箱中過(guò)夜,之后轉入液氮容器中儲存。同時(shí)記錄好凍存管在液氮容器中的位置以便后續查閱和使用。

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