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使用目的:
本試劑盒用于測定血清、血漿及相關(guān)液體樣本中的指標含量。
實(shí)驗原理
本試劑盒應用雙抗體夾心法測定標本中指標水平。用純化的抗體包被微孔板,制成固相抗體,與HRP標記的抗體結合,形成抗體-抗原-酶標抗體復合物,經(jīng)過(guò)徹底洗滌后加底物TMB顯色。TMB在HRP酶的催化下轉化成藍色,并在酸的作用下轉化成最終的黃色。顏色的深淺和樣品中的指標呈正相關(guān)。用酶標儀在450nm波長(cháng)下測定吸光度(OD值),通過(guò)標準曲線(xiàn)計算濃度。
試劑盒組成
1
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30倍濃縮洗滌液
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20ml×1瓶
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7
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終止液
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6ml×1瓶
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2
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酶標試劑
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6ml×1瓶
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8
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標準品
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0.5ml×1瓶
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3
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酶標包被板
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12孔×8條
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9
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標準品稀釋液
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1.5ml×1瓶
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4
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樣品稀釋液
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6ml×1瓶
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10
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說(shuō)明書(shū)
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1份
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5
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顯色劑A液
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6ml×1瓶
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11
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封板膜
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2張
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6
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顯色劑B液
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6ml×1/瓶
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12
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密封袋
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1個(gè)
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操作步驟
1. 標準品的稀釋?zhuān)罕驹噭┖刑峁┰稑藴势芬恢?,用?hù)可在小試管中進(jìn)行稀釋。
2. 加樣:分別設空白孔(空白對照孔不加樣品及酶標試劑,其余各步操作相同)、標準孔、待測樣品孔。在酶標包被板上標準品準確加樣50μl,待測樣品孔中先加樣品稀釋液40μl,然后再加待測樣品10μl(樣品最終稀釋度為5倍)。加樣將樣品加于酶標板孔底部,盡量不觸及孔壁,輕輕晃動(dòng)混勻。
3. 溫育:用封板膜封板后置37℃溫育30分鐘。
4. 配液:將30倍濃縮洗滌液用蒸餾水30倍稀釋后備用
5. 洗滌:小心揭掉封板膜,棄去液體,甩干,每孔加滿(mǎn)洗滌液,靜置30秒后棄去,如此重復5次,拍干。
6. 加酶:每孔加入酶標試劑50μl,空白孔除外。
7. 溫育:操作同3。
8. 洗滌:操作同5。
9. 顯色:每孔先加入顯色劑A50μl,再加入顯色劑B50μl,輕輕震蕩混勻,37℃避光顯色10分鐘.
10. 終止:每孔加終止液50μl,終止反應(此時(shí)藍色立轉黃色)。
11. 測定:以空白孔調零,450nm波長(cháng)依序測量各孔的吸光度(OD值)。 測定應在加終止液后15分鐘以?xún)冗M(jìn)行。
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