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萬物生物 - 慢病毒包裝
來源：萬物 發(fā)布時(shí)間：2021-08-31
慢病毒（Lentivirus）是逆轉(zhuǎn)錄病毒的一種，它需要相對較長的孵育時(shí)間，所以稱之為“慢”病毒，Lenti在拉丁文中就是慢的意思。它包括人免疫缺陷病毒（HIV）、貓免疫缺陷病毒（FIV）、猿免疫缺陷病毒（SIV）、牛免疫缺陷病毒等。其中研究最多的是HIV-1慢病毒。
慢病毒載體（Lentivirus vector）是以慢病毒基因組為基礎(chǔ)，由所需的目的基因取代部分基因構(gòu)建而成。目前使用的慢病毒載體多采用HIV-1基因組改造而來。與一般的逆轉(zhuǎn)錄病毒載體相比，慢病毒載體對分裂細(xì)胞和非分裂細(xì)胞均具有感染能力而具有更廣的宿主范圍。慢病毒載體還可以將外源基因有效地整合到宿主染色體上，從而實(shí)現(xiàn)持久表達(dá)。在感染能力方面可以有效感染神經(jīng)元細(xì)胞、肝細(xì)胞、心肌細(xì)胞、腫瘤細(xì)胞、內(nèi)皮細(xì)胞、干細(xì)胞等多種類型的細(xì)胞，又很少引發(fā)機(jī)體免疫反應(yīng)，能達(dá)到良好的基因治療效果，具有廣闊的應(yīng)用前景。
慢病毒包裝實(shí)驗(yàn)流程如下：
1.根據(jù)目的基因相關(guān)信息（序列，基因序列號等）獲取目的基因；
2.根據(jù)客戶要求選擇對應(yīng)載體；
3. 將目的基因構(gòu)建到慢病毒載體獲得含有目的基因的重組載體；
4. 測序鑒定重組質(zhì)粒，高純化（不含內(nèi)毒素）提取的重組質(zhì)粒；
5. 使用高純提重組載體和慢病毒包裝質(zhì)粒共轉(zhuǎn)染 293FT 細(xì)胞，進(jìn)行病毒包裝并收集上清液；
6. 通過超濾和超速離心濃縮和純化病毒；
7. 使用病毒液感染 293T 細(xì)胞，藥物篩選細(xì)胞，構(gòu)建穩(wěn)定表達(dá)細(xì)胞系。
慢病毒使用安全及注意事項(xiàng)
1.慢病毒相關(guān)實(shí)驗(yàn)請?jiān)谏锇踩駜?nèi)操作。如果使用超凈臺請不要打開風(fēng)機(jī)。
2.慢病毒感染實(shí)驗(yàn)時(shí)，請穿實(shí)驗(yàn)服，佩戴口罩和手套，盡量不用將身體的任何部位裸露在安全柜內(nèi)。
3.操作病毒時(shí)盡量避免氣霧或者飛濺。如果濺出，請立即用70%乙醇加1%的SDS溶液擦拭干凈。
4.如果需要離心，應(yīng)使用密封性好的離心管，或者用Parafilm膜封口后離心。
5.廢棄的含有病毒的培養(yǎng)基或者病毒接觸過的槍頭、離心管、培養(yǎng)板及培養(yǎng)瓶請用84消毒液（1:20），浸泡一天后丟棄。
6.實(shí)驗(yàn)結(jié)束后請用肥皂清洗雙手。
第二代慢病毒質(zhì)粒 第三代慢病毒質(zhì)粒
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標(biāo)書基金實(shí)驗(yàn)咨詢 表觀遺傳組學(xué)分析
課題實(shí)驗(yàn)結(jié)題指導(dǎo) 細(xì)胞分子功能驗(yàn)證
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臨床檢測科研轉(zhuǎn)化 病理染色分子互作