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CRISPR/Cas9基因敲除
來(lái)源：萬(wàn)物 發(fā)布時(shí)間：2021-08-31
CRISPR/Cas9基因敲除
CRISPR(clustered,regularlyinterspaced,shortpalindromicrepeats)是一種來(lái)自細菌降解 入侵的病毒DNA或其他外源DNA的免疫機制。在細菌及古細菌中，CRISPR系統共分成3類(lèi)，其中Ⅰ類(lèi)和Ⅲ類(lèi)需要多種CRISPR相關(guān)蛋白（Cas蛋白）共同發(fā)揮作用，而Ⅱ類(lèi)系統只需要一種Cas蛋白即可，這為其能夠廣泛應用提供了便利條件。
目前，來(lái)自Streptococcuspyogenes的CRISPR-Cas9系統應用最為廣泛。Cas9蛋白（含有兩個(gè)核酸酶結構域，可以分別切割DNA兩條單鏈。Cas9首先與crRNA及tracrRNA結合成復合物，然后通過(guò)PAM序列結合并侵入DNA，形成RNA-DNA復合結構，進(jìn)而對目的DNA雙鏈進(jìn)行切割，使DNA雙鏈斷裂。 由于PAM序列結構簡(jiǎn)單（5’-NGG-3’），幾乎可以在所有的基因中找到大量靶點(diǎn)，因此得到廣泛的應用。CRISPR-Cas9系統已經(jīng)成功應用于植物、細菌、酵母、魚(yú)類(lèi)及哺乳動(dòng)物細胞，是目前最高效的基因組編輯系統。
通過(guò)基因工程手段對crRNA和tracrRNA進(jìn)行改造，將其連接在一起得到sgRNA（singleguideRNA）。融合的RNA具有與野生型RNA類(lèi)似的活力，但因為結構得到了簡(jiǎn)化更方便研究者使用。通過(guò)將表達sgRNA的原件與表達Cas9的原件相連接，得到可以同時(shí)表達兩者的質(zhì)粒，將其轉染細胞，便能夠對目的基因進(jìn)行操作。
作為一種新的基因編輯技術(shù)，CRISPR/Cas9有以下特點(diǎn)和優(yōu)勢：
1、靶向精確性更高。RNA靶向序列和基因組序列必須完全匹配，Cas9才會(huì )對DNA進(jìn)行剪切。
2、可實(shí)現對靶基因多個(gè)位點(diǎn)同時(shí)敲除。
3、實(shí)驗周期短，最快僅需2個(gè)月，節省大量時(shí)間和成本。
4、無(wú)物種限制。
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實(shí)驗培訓文章潤色 動(dòng)物模型裸鼠成瘤
臨床檢測科研轉化 病理染色分子互作