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細胞系細胞株培養構建
來(lái)源：萬(wàn)物 發(fā)布時(shí)間：2021-08-31
1.細胞系
細胞系（cell line）指原代細胞培養物經(jīng)首次傳代成功后所繁殖的細胞群體。 也指可長(cháng)期連續傳代的培養細胞。因此，細胞系狹義的是指可連續傳代的細胞，廣義是指可傳代的細胞。
2.細胞株
通過(guò)選擇法或克隆形成法從原代培養物或細胞系中獲得具有特殊性質(zhì)或標志物的培養物稱(chēng)為細胞株（CellStrain），也就是說(shuō)，細胞株是用單細胞分離培養或通過(guò)篩選的方法，由單細胞增殖形成的細胞群。細胞株的特殊性質(zhì)或標志必須在整個(gè)培養期間始終存在。
3.細胞培養
細胞培養（cell culture）是指在體外模擬體內環(huán)境（無(wú)菌、適宜溫度、酸堿度和一定營(yíng)養條件等），使之生存、生長(cháng)、繁殖并維持主要結構和功能的一種方法。細胞培養也叫細胞克隆技術(shù)，在生物學(xué)中的正規名詞為細胞培養技術(shù)。細胞培養技術(shù)可以由一個(gè)細胞經(jīng)過(guò)大量培養成為簡(jiǎn)單的單細胞或極少分化的多細胞，這是克隆技術(shù)必不可少的環(huán)節，而且細胞培養本身就是細胞的克隆。細胞培養技術(shù)是細胞生物學(xué)研究方法中重要和常用技術(shù)，通過(guò)細胞培養既可以獲得大量細胞，又可以借此研究細胞的信號轉導、細胞的合成代謝、細胞的生長(cháng)增殖等。
4.基本過(guò)程
細胞低溫凍存是培養室常規工作和通用技術(shù)。細胞凍存在-196℃液氮中，儲存時(shí)間幾乎是無(wú)限的。細胞凍存及復蘇的原則是慢凍快融。
1． 凍存細胞
1）選對數增生期細胞(證明無(wú)支原體污染)，在凍存前1d換液。
2）按常規方法把培養細胞制備成懸液，計數，使細胞密度達5×107／ml左右密度，離心，去上清。
3）加入配制好的凍存液（培養液6.8ml，小牛血清2ml，DMSO 1ml，5.6%NaHCO3 0.1ml），按與去上清相同的量一滴一滴加入離心管中，然后用吸管輕輕吹打令細胞重懸。凍存細胞時(shí)培養液中加入保護劑10％二甲基亞砜(DMSO) 或甘油，可使冰點(diǎn)降低，使細胞內水分在凍結前透出細胞外。
4）分裝于無(wú)菌凍存管中，每管加1.5m懸液。
5）旋好凍存管并仔細檢查，一定要蓋緊，做好標記。
6）凍存：在特殊的儀器或簡(jiǎn)易的液氮容器中，按-1℃／min的速度，在30～40min時(shí)間內，下降到液氮表面，再停30min后，直接投入液氮中。要適當掌握下降冷凍速度，過(guò)快能影響細胞內水分透出，太慢則促進(jìn)冰晶形成。
操作時(shí)應戴防護眼鏡和手套，以免液氮凍傷。
2. 復蘇細胞
1）從罐中取出凍存管。
2）迅速放入36℃～37℃水浴，不時(shí)搖動(dòng)，使其急速融化，30～60s內完成。
3）凍存管用70％酒精擦拭消毒后，打開(kāi)蓋子，用吸管將細胞懸液注入離心管中，再滴加10ml培養液。
4）低速離心(500～1000r／min) 5min，去上清后再用培養液洗一次。
5）用培養液適當稀釋后，裝入培養瓶37℃培養，次日更換一次培養液后，繼續培養。以后仍按常規進(jìn)行培養。
凍存細胞數量要充分，密度應達到107／ml，在融后稀釋20倍時(shí)，仍能保持5×105／ml數量
3.傳代培養
1）吸掉或倒掉培養瓶?jì)扰f培養液。
2）向瓶?jì)燃尤胍鹊鞍酌敢汉虴DTA混合液少量。以能覆蓋培養瓶底為宜。
3）置37℃孵箱或室溫（25℃溫度）下進(jìn)行消化，2~5min后把培養瓶放在倒置顯微鏡下進(jìn)行觀(guān)察，當發(fā)現胞質(zhì)回縮、細胞間隙增大后，應立即中止消化。
4）吸出消化液，向瓶?jì)燃尤際anks液少量，輕輕轉動(dòng)培養瓶，把殘留消化液沖掉，然后再加培養液。如果僅使用胰蛋白酶消化，在吸除胰蛋白液后，可直接加入少量含血清的培養液，終止消化。
5）使用彎頭吸管，吸取瓶?jì)扰囵B液，按順序反復輕輕吹打瓶壁細胞，使之從瓶壁脫離形成細胞懸液。吹打時(shí)動(dòng)作要輕柔，以防用力過(guò)猛損傷細胞。
6）用計數板計數后，分別接種于新的培養瓶中，置CO2培養箱中進(jìn)行培養。
7）細胞培養換液時(shí)間應根據細胞生長(cháng)的狀態(tài)和實(shí)驗要求來(lái)確定。一般2～3d后應換一次生長(cháng)液。待細胞鋪滿(mǎn)器皿底面，即可使用；也可繼續傳代擴大培養或換成維持液。
5.注意事項
1）防止細胞交叉污染。
2）細胞污染的預防。
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實(shí)驗培訓文章潤色 動(dòng)物模型裸鼠成瘤
臨床檢測科研轉化 病理染色分子互作
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