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HE染色
來(lái)源：萬(wàn)物生物 發(fā)布時(shí)間：2021-11-02
HE染色（hematoxylin-eosin staining）
HE 染色：又稱(chēng)蘇木素-伊紅染色法，其中蘇木素是Hematoxylin，簡(jiǎn)稱(chēng)H，伊紅是Eosin， 簡(jiǎn) 稱(chēng)E，HE 染色法是組織學(xué)、胚胎學(xué)、病理學(xué)教學(xué)與科研中最基本、使用最廣泛的技術(shù)方法。 這種方法對(duì)組織細(xì)胞的各種成分都可著色，經(jīng)過(guò) HE 染色，細(xì)胞核被蘇木素染成藍(lán)紫色，細(xì)胞質(zhì)被伊紅染色呈粉紅色。蘇木素是堿性染料，藍(lán)紫色，可以使細(xì)胞核等著色。被蘇木素著色的結(jié)構(gòu)本身為酸性，具有嗜堿性(Basophilic)。伊紅是酸性染料，粉紅色?？梢詫⒋蠖鄶?shù)細(xì)胞的細(xì)胞質(zhì)染成紅色。被伊紅著色的結(jié)構(gòu)本身為堿性，具有嗜酸性(Acidophilic)。
HE染色法過(guò)程：
1、脫蠟
1.1從溫箱中取出烤干的切片,立即投入二甲苯中脫蠟5～10min(可在二瓶中進(jìn)行),脫蠟時(shí)間長(zhǎng)短取決于蠟是不徹底溶解。氣溫低可延長(zhǎng)時(shí)間,氣溫高可適當(dāng)縮短時(shí)間或在溫箱中加速脫蠟。
1.2移入無(wú)水酒精(100%)(二瓶)中,約2min。
1.3移入90%酒精中(二瓶),約2min。
1.4移入80%酒精中(二瓶),約2min。
1.5移入70%酒精中,約2min。
1.6移入水中,洗去酒精,約2～3min。
1.7移入蒸餾水中,約2min。
2、染色
2.1移入蘇木素中,浸染5min,一般以稍深染為宜。
2.2移入水中,洗去蘇木素和浮色,約1min。
2.3移入分化液(1%鹽酸酒精)中,分化幾秒至30秒鐘, 使切片褪色至淡蘭紅色即可。分化的作用,可使細(xì)胞漿蘭色脫去,而細(xì)胞核更加清晰,鮮麗,分化不足時(shí),胞漿帶蘭,胞核過(guò)染,分化過(guò)度時(shí),胞核太淡,難以辯認(rèn),可再退回蘇木素染液, 延長(zhǎng)一定時(shí)間。
2.4移入流水中,洗滌30～60min,使組織呈鮮蘭色或天蘭色(蘭化)。
2.5移入伊紅液中,浸染2～5min,如著染緩慢 , 可在伊紅液中加入冰醋酸 (100ml伊紅液加1～2滴冰醋酸)以助染。
2.6移入水中,洗去伊紅浮液,并用紗布擦凈玻片上的多余染料。
3、脫水
3.1吸去玻片上的水分后多入80%酒精中,(二瓶)脫水,約1～2min, 如在酒精中褪色很快時(shí),可迅速移入90%酒精或返回伊紅液中復(fù)染。
3.2移入90%酒精中(二瓶)脫水,約2～4min。
3.3移入無(wú)水酒精(100%酒精)(二瓶)徹底脫水,約4～8min。
4、透明
4.1移入二甲苯Ⅰ中透明3～5min。
4.2移入二甲苯Ⅱ中透明5～10min。
5、封固
用樹(shù)膠封固,先從二甲苯Ⅱ中取出切片,將組織外圍的二甲苯迅速擦去,在滴上一滴樹(shù)膠于組織片上,然后取干凈的蓋玻片,仔細(xì)加在封固劑上,慢慢壓平, 使蓋片位置適中。切片封固后,放在溫箱中烤干,或平置涼干后裝盒。
注意事項(xiàng)
切片脫水透明切片經(jīng)HE染色后，要徹底脫水透明，才能用中性樹(shù)膠封蓋。如果脫水不徹底，封片后呈白色霧狀，鏡下觀察模糊不清，且容易褪色。切片1-2級(jí)無(wú)水乙醇脫水，也可使用石炭酸二甲苯進(jìn)行脫水。石炭酸有較強(qiáng)脫水能力，但長(zhǎng)時(shí)間可使切片脫色，因此要經(jīng)過(guò)多次二甲苯以使石碳酸完全除去。
結(jié)果展示：
結(jié)果：細(xì)胞核呈藍(lán)色，細(xì)胞質(zhì)，肌纖維，膠原纖維和紅細(xì)胞呈不同程度的紅色。鈣鹽和 細(xì)菌可呈藍(lán)色或紫藍(lán)色。
粘蟲(chóng)Mythimna separata 腸道HE染色（200X）
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標(biāo)書(shū)基金實(shí)驗(yàn)咨詢(xún) 表觀遺傳組學(xué)分析
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臨床檢測(cè)科研轉(zhuǎn)化 病理染色分子互作