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BSP甲基化測(cè)序
亞硫酸氫鹽處理后測(cè)序(bisulfite sequencing PCR,BSP)法是檢測(cè)基因甲基化的經(jīng)典方法,其原理為:用亞硫酸氫鈉修飾處理基因組DNA,所有未發(fā)生甲基化的胞嘧啶(C)被轉(zhuǎn)化為尿嘧啶(U)而甲基化的胞嘧啶則不變。
基因組DNA經(jīng)亞硫酸鹽處理后,設(shè)計(jì)BSP引物擴(kuò)增目的片段,此時(shí)尿嘧啶(U)全部轉(zhuǎn)化為胸腺嘧啶(T),最后對(duì)PCR產(chǎn)物進(jìn)行測(cè)序就可以判斷CpG位點(diǎn)是否發(fā)生甲基化。
技術(shù)優(yōu)勢(shì)
(1) 檢測(cè)序列長(zhǎng),可長(zhǎng)達(dá)200-400bp
(2) 分辨率高,可檢測(cè)到每一個(gè)堿基的甲基化狀況
(3) 對(duì)于樣品要求低,適用于新鮮、冷凍和FFPE樣本
服務(wù)內(nèi)容
1. 基因組DNA的Bisulfite轉(zhuǎn)化;
2. BSP(Bisulfite Sequencing PCR)法,包括引物設(shè)計(jì)與合成,TA克隆測(cè)序及數(shù)據(jù)分析。
樣品要求
(1) 若提供基因組DNA,需≥2μg
(2) 若提供的材料為新鮮組織、血液、細(xì)胞等生物材料,請(qǐng)?zhí)峁┳銐蛱崛?/span>2μg以上基因DNA的材料量
(3) 基于所選擇的DNA甲基化檢測(cè)方法,請(qǐng)?zhí)峁┫鄳?yīng)的引物或引物序列
BSP服務(wù)完成時(shí)提供
(1) Bisulfite處理的基因組DNA
(2) 實(shí)驗(yàn)報(bào)告(包括BSP產(chǎn)物的直接測(cè)序報(bào)告)
(3) 5個(gè)有效的陽(yáng)性克隆
(4) 空點(diǎn)圖
結(jié)果展示
BSP測(cè)序圖
BSP點(diǎn)狀圖和BSP序列比對(duì)
BSP柱狀圖